NCTC1469小鼠正常肝細胞

簡稱：NCTC1469

中文名：小鼠正常肝細胞

別名：Hmec-1; HMEC1; CDC/EU.HMEC-1; Human Microvascular Endothelial Cell line-1

種屬：小鼠

來源：肝；自發永生；C3H/An

培養條件：H-DMEM+10%FBS+1%雙抗

培養環境：空氣，95%； 二氧化碳 (CO2)，5%

狀態：貼壁

NOTE: FOR RESEARCH USE ONLY.

細胞培養操作步驟：

1. 吸走多余培養基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動培養瓶潤洗細胞；

2. 吸干凈PBS后

加入1mL 0.25%胰-酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養皿使胰-酶浸沒細胞表面，培養瓶放37度培養箱消化；

（細胞對于消化比較敏感，消化過度會嚴重影響細胞狀態，導致細胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長。細胞消化到細胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時即可終止，禁止消化到細胞*漂浮。混勻細胞時盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）

3. 加入6-8ml*培養基終止消化，輕輕吹下細胞混勻；

4. 將混勻的細胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養基重懸37度培養箱繼續培養；

傳代比例: 不同細胞生長速度不一，具體傳代比例視細胞生長速度而定，大部分細胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細胞可以1:2傳代。

注意事項：不同品牌胰-酶消化時間差別較大，注意嚴格控制消化時間
消化傳代細胞時吹打細胞注意盡量輕柔，不要產生過多氣泡以免影響細胞狀態。

Cell cryopreservation

1.凍存液：92%*培養基+8%DMSO（可以根據實驗室條件自行選擇）

2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。

凍存方法：

1.消化并離心獲得細胞沉淀后，加配置好的凍存液輕輕重懸細胞；
2.將細胞懸液盡快移入已經做好標記的凍存管；
3.將凍存管轉入程序凍存盒，放入-80度冰箱過夜，第二天轉入液氮保存；沒有程序凍存盒的實驗室，加入細胞后可以將凍存管放在泡沫盒中4度靜置5-10min，再-20度靜置2h后轉入-80度過夜，第二天轉入液氮保存。

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