牛結節性皮膚病間接ELISA抗體檢測試劑盒

僅供科研

牛結節性皮膚病（Lumpy skin disease，LSD）是由牛結節性皮膚病病毒（Lumpy skin disease virus，LSDV）引起的一種急性或亞急性傳染病，使病畜全身被結節覆蓋，甚至引發死亡。其暴發會對牛養殖國家造成嚴重的經濟損失。因此，快速檢測出感染牛，對于預防病毒擴散和控制疾病傳播至關重要。

【檢測原理】

在反應板微孔中包被牛結節性皮膚病病毒特異性抗原，待檢血清中的特異性抗體與包被抗原特異性結合，形成抗原抗體復合物。加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的抗牛 IgG 抗體，與微孔中的抗原抗體復合物結合。加入 TMB 顯色底物后，微孔中結合的 HRP 催化底物反應呈藍色。顏色反應的深淺與樣品中存在的抗牛結節性皮膚病病毒特異性抗體的量成正比。

【試劑盒組成】

【儲存條件及有效期】

本試劑盒的儲存溫度為 2-8°C 。有效期 12 個月。

【自備實驗材料】

微量可調移液器及配套槍頭 恒溫培養箱、計時器、記號筆

酶標儀（含波長 450nm 的濾光片） 去離子水或蒸餾水

洗板機（可選）

【試劑以及樣品制備】

洗液 1×：使用前，濃縮洗液應恢復至室溫（20～25℃），并搖動，使沉淀溶解（最好在 37℃恒溫培養箱中加熱 5～10 min）， 然后用蒸餾水作 10 倍稀釋（例如：60 mL 的濃縮洗滌液加上 540 mL蒸餾水）混勻，稀釋好的洗液 2～8℃可存放 7 日。

【操作步驟】

1.   準備：所有試劑在使用前應先恢復至 15～25℃，通過渦旋振蕩器輕振所有試劑混勻；

2.   取出密封的抗原包被板，沿包裝袋切口處撕開，記錄樣品位置；

3.   待檢樣品稀釋：將待檢樣品用樣品稀釋液按 1:50 倍稀釋（196

µL 樣品稀釋液中加 4 µL 待檢血清樣品），陰陽性對照不用稀釋；

4.   在 ELISA 包被板上：加入稀釋好的樣品，100µL/孔，陽性對照血清加 2 孔，100µL/孔；陰性對照血清加 2 孔，100µL/孔； 貼上封板膜；

5.   置 37℃恒溫箱中避光孵育 30 min；

6.   小心取掉封板膜，棄去孔中液體。每孔加約 300μL 洗液 1×， 靜置 1min 后，棄去洗滌液。洗滌 4 次，最后一次拍干。洗板間隔應避免微孔干燥后在吸水紙上拍干；

7.   在所有孔內加入 100μL 的酶結合物工作液；

8.   置 37℃恒溫箱中避光孵育 30 min；

9.   小心取掉封板膜，棄去孔中液體。洗滌 4 次，方法同 6；

10.  將底物 A 液與底物 B 液按 1:1 混合，加入孔中，100 µL/ 孔， 貼上封板膜；

11.  置 37℃恒溫箱中避光孵育 10 min；

12.  每孔加入 50μL 終止液，振蕩混勻，5min 內在酶標儀 450nm 讀數。

【注意事項】

1.        所有實驗過程應遵守農業農村部關于牛結節性皮膚病檢測相關的規定。

2.       牛結節性皮膚病間接ELISA抗體檢測試劑盒僅用于體外診斷使用，應2～8℃冷藏運輸。

3.        所有的試劑在使用前應先恢復至18～25℃，用渦旋振蕩器振蕩混勻。

4.        濃縮洗液10×在低溫條件下會產生結晶，使用前要溫育使其溶解。

5.        注意防止試劑盒成分的污染，不同批次試劑盒成分不要混用， 不要使用超過有效期的試劑，未用完的反應板條應加干燥劑密封，連同未使用完試劑放回2～8℃保存。

6.        待檢血清數量較多時，應先稀釋完所有待檢血清，再加到反應板上， 使反應時間一致。

7.        底物 A 液和底物 B 液對強光和氧化劑敏感，應避光保存，防止氧化劑污染，對皮膚有刺激性。

8.        樣品稀釋液、對照血清與酶標抗體中含有微量防腐劑，應防止與皮膚接觸。

9.        試驗廢料、廢水等應做無害化處理，以免污染環境。

10.     嚴格遵守這些條款可以獲得理想的結果，特別是液體用量、作用時間和溫度必須準確。